分光光度计是常用的检测仪器，为了减少实验中的误差。需要对仪器进行校准。分光光度计的检测原理是溶液中的物质对光的选择性吸收，分光光度计的校准利用的也是这一原理。
波长的校准
根据物质的颜色与吸收光颜色的互补关系，将比色皿架取下，插入一块白色硬纸片，打开光源灯，将波长调节器在700nm向420nm方向慢慢转动，观察从出口狭縫射出的光线颜色是否与波长调节器所示的波长符合，如符合，则说明分光系统基本正常。
比色皿(吸收池)的校准
1.用铅笔在洗净的吸收池毛面外壁编号并标注放置方向；
2.在吸收池中都装入测定用空白参比溶液，以其中一个为参比，在测定条件下，测定其他吸收池的吸光度；
3.如果测定的吸光度为零或两个吸收池吸光度相等，即为配对吸收池；
4.若不相等，可以选出吸光度小的吸收池为参比，测定其他吸收池的吸光度，求出校正值；
5.测定样晶时，等待测溶液装入校准过的吸收池中，将测得的吸光度值减去该吸收池的校正值即为测定真实值。
吸光度的校准
吸光度的准确性是反映仪器性能的重要指标。一般常用碱性重铬酸钾标准溶液进行吸光度校正，并检查仪器性能是否稳定。
1.碱性重铭酸钾标准溶液的配制：将在110℃干燥3小时以上的分析纯重铬酸钾配制成0.0303克/升浓度的标准溶液。配制所用溶剂是0.05mol/l的氢氧化钾溶液。
2.标准溶液吸光度的测定：取上述碱性重铬酸钾标准溶液放入10.0毫米的吸收池中，在25℃时用1纳米的谱带宽度,以0.05mol/l氢氧化钾溶液为参比液，测定其在不同波长下的吸光度或透光率。测定的数值与标准数据比较以确定吸光度的误差。