1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/l，120 ng/l ，60 ng/l，30 ng/，15 ng/l）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48t的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48t的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。 测定应在加终止液后15分钟。
小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素)；att-20
小鼠小胶质细胞；bv2
小鼠骨髓瘤细胞；fox-ny
小鼠胚胎成纤维细胞；mef
小鼠淋巴瘤细胞(nk靶细胞)；yac-1
野生型人c-kit受体细胞株；a7d
小鼠原b细胞株；baf3
小鼠脑瘤细胞；bc3h1
小鼠成肌细胞；c2c12
小鼠肝癌细胞；hepa 1-6 [hepa1-6]
小鼠肥大细胞瘤细胞；p815
小鼠胚胎成纤维细胞；3t6-swiss albino
小鼠胚胎成纤维细胞；c3h 10t1/2 2a6
小鼠树突状细胞肉瘤细胞；dcs
小鼠淋巴瘤细胞；el4
小鼠前胃癌细胞；mfc
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞；raw 264.7 [raw264.7
小鼠胚胎成纤维细胞；3t3-l1
小鼠乳腺癌细胞；ccc-ca761-03
小鼠胚胎成纤维细胞；balb/c 3t3
小鼠淋巴细胞白血病；l1210
小鼠肺腺癌细胞系；la795
c3h/an小鼠结缔组织细胞（l929-tk-）；ltk-
小鼠b淋巴细胞杂交瘤细胞；sh2
小鼠b淋巴细胞杂交瘤细胞；sh3
仓鼠/小鼠杂交瘤细胞；145-2c11
小鼠黑色素瘤细胞；b16
小鼠t淋巴细胞；cl.ly1+2-/9
小鼠单核巨噬细胞；j774a.1
小鼠肾集合管细胞(sv40转化)；m-1
绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞；mfc-gfp
小鼠肾足细胞；mouse podocyte
小鼠淋巴瘤细胞；p388d1(il-1)
小鼠子宫颈癌细胞；u14
绿色荧光蛋白标记小鼠子宫颈癌细胞；u14-gfp
小鼠浆细胞瘤；mpc-11
小鼠胚胎成纤维细胞；pa317
转pytl基因小鼠睾丸支持细胞；15p-1